基因治疗遗传病

通过直接或间接的手段将正常基因转移入受累细胞以纠正其基因缺陷和发挥功能的一类治疗方法称为基因治疗。目前针对遗传病进行基因治疗的方法主要有体外基因转移、体内基因转移及整合型基因治疗等。

一、体外基因转移

1.载体构建：首先需要构建含有目的序列的重组DNA分子，然后将其转入细菌或其他微生物中扩增，并获得大量含目的DNA分子的菌落悬液。其次在体外利用逆转录酶合成相应的互补DNA(cDNA)文库，在cDNA末端连接上荧光素标记的寡核苷酸探针，与供体细胞转录本杂交，可以检测到插入突变的存在。最后用核酸抽提试剂盒从供体细胞中提取出RNA，再经反转录产生cDNA，以此为模板进行PCR扩增，从而可检出插入缺失位点。

2.转化：将带有目的基因的载体导入受体细胞后，可以通过转化作用使受体细胞染色体发生改变而达到表达该基因的目的。

3.转导：如果受体细胞是不能转化的，可通过转导方法使其表达目的基因。

4.电穿孔法：是利用高电压脉冲处理生物大分子(如DNA)的技术。它是一种非热非激光非离子非放射性基因转移技术，其原理是当极低强度的直流电场加于细胞膜时，由于双层结构中的脂质分子快速移动，使得细胞内外形成暂时性的正电荷分布不均匀，负电荷区域大于正电荷区域，此时带电的大分子易于进入胞内，实现对受体细胞的转化作用。

二、体内基因转移

1.病毒颗粒介导的基因转移：包括粒腺苷受体反义核酸的递送以及应用病毒表面糖蛋白(GP)的Fc段作为载体来递送编码人血管紧张素转换酶(angiotensin converting enzyme, ACE)抑制剂的小鼠白细胞介素-10基因两种方式。

2.非病毒颗粒介导的基因转移：主要包括阳离子聚合物、纳米球、脂质微泡、脂质体等。

三、整合型基因治疗

即把一个外源基因整合至宿主细胞的基因组中并使之稳定表达，从而达到治疗疾病的目的。常用的整合工具包括感受态细胞、限制性核酸内切酶系统、转座子等。

临床上常见的遗传性疾病有血友病、先天愚型、半乳糖血症、苯丙酮尿症、视网膜母细胞瘤、遗传性耳聋等。对于大多数遗传病患者而言，基因治疗尚处于临床试验阶段，但部分难治性疾病已取得一定成效。

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